“非典”检测方法取得重大突破

[生物通讯]自2002年11月中国大陆广东省爆发非典型性肺炎以来，该疾病已经扩散到23个国家。截止2003年4月15日，世界卫生组织已经收到3235个病例报告，其中已经有154人不治死亡。

        2002年11月1日至2003年4月19日日内瓦当地时间17:00，来源：世界卫生组织网站 

    截止至2003年04月20日中国大陆地区疫情如下（摘自新华网）  

根据世界卫生组织的定义，严重急性呼吸系统综合症的症状和判定条件包括：1、38℃以上的高烧2、一种或多种呼吸系统不适 （例如咳嗽，气短和呼吸困难）3、在７天内和ＳＡＲＳ患者有过近距离接触。另外，ＳＡＲＳ症状可能还包括头疼，肌肉紧张，食欲缺乏，皮疹，腹泻和意识混乱等。但是根据人的体质不同，ＳＡＲＳ也可能不表现出任何症状。据研究，ＳＡＲＳ的潜伏期一般是２到７天，其中以第３天到第５天为发病高峰。目前已知的最长潜伏期是１０天。根据目前已知的数据，ＳＡＲＳ主要通过接触，飞沫和体液传播。在其潜伏期内，ＳＡＲＳ病毒传播能力极强。根据港大医学院的统计，ＳＡＲＳ的传染率大约在１：１.５左右（即在３个与ＳＡＲＳ患者接触的人中有两个人可能感染）。                                                          

最初香港中文大学和香港威尔斯亲王医院微生物系的研究者提出，引起ＳＡＲＳ的病原体可能是副黏病毒科的病毒。这种被称为间质肺病毒（metapneumovirus）的病毒是副粘病毒家族成员之一。尽管这种病毒2001年才被发现，但有证据表明，它至少存在20年以上了，并且可能对禽鸟类和人有交叉传播。这种病毒可引起类似呼吸道合胞病毒感染的呼吸道疾病。但这种说法随后被新的发现所否定。

新英格兰医学杂志（NEJM）4月10日在主页上先行公开了美国疾病预防及控制中心（CDC）与世界卫生组织（WHO）的联合研究小组、以及德国Bernhard Nocht研究所（BNI）的两篇有关从SARS患者分离出新种冠状病毒的论文。两个小组各自分离出的新种冠状病毒的片断遗传基因排列是一致的，可以确认是同一种病毒。

CDC-WHO小组理由为以下三点：1、一半以上的患者标本中未检测出包含有人类偏肺病毒（Human metapneumovirus，hMPV）的副黏液病毒群；2、从加拿大的患者身上也检测出了新种冠状病毒，否定了副黏液病毒群致病的结论。3、荷兰研究人员用冠状病毒和副黏液病毒分别感染短尾猿，发现感染冠状病毒的一组出现非典型肺炎症状，而感染副黏液病毒的一组出现鼻炎症状。BNI小组称从发病者身上除检测到新种冠状病毒之外，还发现了肺炎衣原体（Chlamydia Pneumoniae）与副黏液病毒群，目前无法判定后两者与SARS发作的关系。

       4月16日电世界卫生组织负责传染病的执行干事戴维·海曼16日宣布，经过全球科研人员的通力合作，终于正式确认严重急性呼吸综合症（SARS）即非典型性肺炎的病原体是一种新型的冠状病毒（Human Pheumonia-Associated Coronavirus,HPAC）。自从世界卫生组织今年3月12日向全球发出“非典”警报后，中国、德国、加拿大、法国、美国、中国香港、日本、荷兰、英国和新加坡10个国家和地区的13个实验室，招集各路专家潜心研究并同世界卫生组织合作，现在终于找到了非典型肺炎的“病根”。 来自这13个实验室的科学家16日在日内瓦举行的会议上一致认定了变种冠状病毒的作用。　　

据专家介绍，目前我国对非典型肺炎诊断主要依靠发烧、干咳、胸透阴影、白细胞正常或下降等临床指征，尚无客观的实验室诊断指标，对正确诊断治疗和预防非典型性肺炎造成了很大的困难，在一定程度上增加了疑似病人的范围。     

                                 据法新社自德国汉堡报道：德国Artus 生物技术公司十四日宣布研发出一种SARS快速试剂，只须两小时就能诊断出病人是否感染SARS，并于当天起在其德国、美国与马来西亚分公司对外免费发放此一试剂，若证明有效将上市销售，成为全球第一种SARS商用试剂。

ARTUS是德国一家专业研究病原诊断的生物公司，成立于1998年，生产各种针对病毒、细菌、寄生虫及基础研究用的检测试剂盒，总部设在汉堡。Artus运用现代的基因手段——聚合酶链式反应这一革新方法使病原诊断实时、可靠，主要应用领域为人类医药、兽医、食品工业和生物研究。作为Bernhard Nocht研究中心下属的独立单位，Artus拥有一批极富经验的科学家。早在2000年11月ARTUS就因在德国发现首例疯牛病（BSE）而广为人知，今天，除快速诊断BSE试剂盒外， ARTUS已成功开发了四十余种不同病原体的检测试剂盒。该公司特聘PCR技术的发明者 Kelly Mollius博士为科学顾问。

    此次ARTUS与Bernhard Nocht研究中心合作开发出了这种快速检测试剂盒。该试剂盒利用RT-PCR方法来对这种新型的冠状病毒基因组的一段80bp的区段进行扩增并定量检测。Artus表示，其它实验室的测试法只能在病人遭感染后十至二十日才能测出病毒，而他们的试剂可以迅速诊断SARS，及早把病人隔离和治疗,进而减缓病毒扩散。他们已将多份试剂免费提供给某些亚洲国家、中国、香港、澳洲、美国、德国与北欧国家的数家实验室试用。 该公司指出，这种快速试剂灵敏度高,可检测早期病患者，扩增出病人咽喉分泌物、唾液与排泄物样本中的病毒的基因序列，在两小时内就能获得结果。其它实验室已研发出类似测试法，但目前还没有正式上市销售。

   香港基因有限公司是专业性生物仪器、试剂供应公司。基因有限公司及其在中国大陆的合作伙伴在第一时间内将ARTUS公司的冠状病毒检测试剂盒引进中国，为非典型性肺炎的快速诊断和治疗提供了有力的工具。

  荧光定量PCR技术原理及在分子诊断中的应用

 荧光实时定量PCR技术又称REAL-TIME PCR，原理是利用荧光染料和探针标记跟踪PCR产物，对反应进行实时监控；通过加入已知浓度的标准样品做标准曲线，准确定量待测样品的初始模板量。定量PCR技术自产生以来，不断发展完善，到目前为止已经非常成熟了。标记方法由最初单一的染料法，发展到了特异性更高的探针法，如Taqman、MolecueBeacon、Fret等不同方法的标记探针。 在过去很长一段时间里，由于PCR检测的灵敏性和不稳定性，容易产生假阳性,但是随着荧光定量PCR技术的发展成熟和完善，特别是Taqman方法的广泛使用，使得荧光定量PCR以一种新的PCR检测技术得以在在临床检测上使用。Taqman探针法具有高特应性和可靠性，实验结果稳定重复性好；由引物、探针序列和引物探针相互作用关系的双重保证克服了普通PCR非特异性的缺陷，使得荧光定量PCR技术在分子诊断中的应用得以广泛开展。荧光定量检测技术相对于抗原抗体法检测具有检测灵敏度高和可以准确定量等优势。

  荧光定量检测技术的应用不仅限于临床检测，在基础研究和海关、食品卫生检疫方面的应用前景都相当广泛。
（生物通综合报道）