生物通报道：上海巴斯德研究所的周保罗研究员早年毕业于上海第二医科大学，获得美国纽约州立大学博士学位，主要从事HIV和禽流感领域的研究工作。近期其研究组接连在Journal of Virology，Molecular Biotechnology杂志上发表文章，获得了禽流感H5N1病毒，以及人单克隆抗体研究方面的新成果。

第一篇文章中，研究人员报道称，识别H5血凝蛋白的保守表位的人单克隆抗体可以广谱中和高致病性禽流感H5N1病毒，这是首例关于人的中和抗体可以广谱中和几乎所有的H5N1各个型和亚型病毒的报道。

自1996年以来，高致病性禽流感H5N1病毒感染了超过5亿家禽，并且在亚洲、非洲和欧洲出现了越来越多关于人感染H5N1病毒的报道。至2011年10月10日，已有566例人感染被确诊，其中332人死亡(http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/country/en/)。目前的疫苗往往只对相似的病毒株有保护作用。

在这项研究中，上海巴斯德所的博士生胡红星等人在周保罗教授的指导下用高灵敏度的H5N1假病毒系统从感染过H5N1病毒但康复的病人记忆B细胞中筛选出了3株抗H5N1病毒的人源单克隆抗体。其中单克隆抗体65C6 能够中和除了7.2亚型之外几乎所有型和亚型的H5N1 病毒，并在老鼠模型中显示了很好的预防和保护的作用。通过对血凝蛋白和抗体复合物的电镜分析，结合酵母展示技术，研究人员发现单克隆抗体65C6能够识别位于血凝蛋白球形头部的构象表位。该表位在几乎所有的H5N1的血凝蛋白上都是高度保守的。提示该广谱中和抗体可以用来治疗感染了高致病性禽流感H5N1的病人，另外基于该保守表位可以设计免疫原从而通过免疫诱导出针对该表位的抗高致病性禽流感H5N1的广谱中和抗体反应。

另外研究人员介绍了人单克隆抗体新型制备新技术，他们用波浪生物反应器进行灌注培养稳转了人单克隆抗体基因的果蝇细胞系高产人单克隆抗体。这是首次关于用波浪生物反应器灌注培养稳转了人单克隆抗体基因的果蝇S2细胞来产生人单克隆抗体的报道。

治疗性人单克隆抗体已经增长为数十亿美元的产业，因而建立一个稳定的培养条件以满足人单克隆抗体的大规模表达是非常重要的。波浪生物反应器于二十世纪九十年代后期被用于哺乳动物及昆虫细胞的蛋白表达，但是用波浪生物反应器来灌注培养稳转了人单克隆抗体基因的果蝇稳转细胞表达人单克隆抗体蛋白尚属首次。

在该研究中上海巴斯德所的研究助理王璐岚和博士生胡红星在周保罗教授的指导下克隆了抗高致病性禽流感病毒的血凝蛋白的人单克隆抗体基因，并构建到果蝇诱导型表达载体里面，稳转了果蝇S2细胞系，通过有限稀释法拿到高表达人单克隆抗体的单细胞克隆。对稳转了人单克隆抗体的单克隆细胞株分别用来在灌注和非灌注的生物反应器中进行比较培养，发现灌注培养方法在获得细胞数量与表达抗体蛋白产量上明显优于后者，且这两种方法生产的抗体都是有中和活性的。这些结果表明用波浪生物反应器进行灌注培养S2稳转细胞系进行大规模蛋白表达是非常好的方法。

（生物通：万纹）

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