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Nature Protocols报道细胞蛋白质和mRNA高通量检测新方法
【字体: 大 中 小 】 时间:2017年05月23日 来源:生物通
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《Nature Protocols》报道的FISH-Flow技术能一次性高通量的分析细胞内数千万的mRNA和蛋白质,使研究人员可以同时分析多种免疫细胞对外来物质的反应,从而更快、更及时地筛查疾病。不用使用人工试剂,该方法可直接监测个体免疫细胞对抗外来物质时的实时反应。
FISH-Flow是一种以流式细胞术为基础的高通量多参数测量方法,利用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)探针检测哺乳动物细胞内的mRNA水平,在灵活度方面明显优于前期的以显微镜为基础的检测方法。
该方法主要步骤包括细胞固定化、透化、和荧光探针杂交。表面和胞内蛋白标志物可一次性被荧光标记抗体标记,从而达到同时检测蛋白质和mRNA的效果。文中使用外体刺激物抗原引发致敏T细胞激活,使用FISH-Flow检测细胞因子mRNA表达仅需30小时。
另外,半自动的单管进样版本可与商用细胞洗涤器偶联,可减少细胞损失和内部算子变异,以及节省操作时间。
罗格斯大学公共卫生研究所的医学教授Maria Laura Gennaro是本文的通讯作者,他在文中细致地描述了如何使用这种新方法来观察细胞的抗原应答。由于该方法可以识别很多疾病指标,所以研究人员下一步计划将其应用于感染性和非感染细胞肺部疾病(如结核病)和某些癌症的早期诊断和治疗。
原文标题:FISH-Flow, a protocol for the concurrent detection of mRNA and protein in single cells using fluorescence in situ hybridization and flow cytometry
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