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为解决野生与栽培石斛品质差异问题,深圳兰科植物保护与利用重点实验室等单位的研究人员对细茎石斛开展代谢组分析。结果发现两者代谢物有显著差异,该研究为石斛质量控制和产业发展提供支撑,值得科研读者一读。
在神奇的植物世界里,石斛属(Dendrobium spp.)植物可是相当独特的存在。它们既是珍贵的中药材,有着神奇的药用价值,又因美丽的花朵成为极具吸引力的观赏植物 ,深受人们的喜爱。然而,野生石斛的生长环境十分苛刻,对温度、湿度、光照等条件要求极高,再加上人们过度采挖和生态环境的破坏,野生石斛资源变得越来越稀少,许多品种都面临着濒危的困境。为了满足市场对石斛的大量需求,人工栽培石斛逐渐兴起,成为了供应市场的主要方式。
可新的问题又出现了。生长环境的变化会不会影响石斛的 “内在品质” 呢?毕竟自然环境和人工栽培环境差别很大,就像让一个人突然从舒适的乡村搬到繁华忙碌的城市生活,肯定会有所改变。人们都知道,石斛中的多糖、黄酮类化合物、酚酸等天然代谢产物,是决定它营养价值和药用效果的关键因素。不同的生长环境,比如栽培基质(植物生长的 “土壤” 环境)、光照强度、温度等条件的差异,都可能让这些代谢产物的含量和种类发生变化。要是不能清楚地了解野生和人工栽培石斛之间的差异,在药用和开发利用时,就可能遇到各种问题。而且,对于人工栽培的石斛来说,不仅要保证产量,更要注重有效成分的含量,这样才能保证它的质量。所以,深入研究不同环境下石斛的代谢特征,就变得非常重要。
为了揭开这些谜团,来自深圳兰科植物保护与利用重点实验室、国家林业和草原局兰科植物保育与利用重点实验室等单位的研究人员,在《BMC Plant Biology》期刊上发表了一篇名为 “Comparative metabolomic analysis provides insights into the metabolite profiles of wild and cultivated Dendrobium flexicaule” 的论文 。他们把目光聚焦在细茎石斛(Dendrobium flexicaule)上,这种石斛可是中国国家一级重点保护野生植物,在国际自然保护联盟(IUCN)的濒危物种红色名录里也榜上有名。研究人员通过对野生和人工栽培细茎石斛的代谢组进行比较分析,发现两者在黄酮类、脂质、氨基酸等代谢物的含量和种类上有明显差异,还找到了这些代谢物与植物激素之间的关联。这一研究成果为石斛的质量控制、健康功效研究以及产业发展,打下了坚实的理论和物质基础。
在这项研究中,研究人员运用了几种关键技术方法。他们采集了野生和人工栽培细茎石斛的样本后,采用超高效液相色谱 - 质谱联用(UPLC - MS/MS)技术 ,对样本中的代谢物进行分离和鉴定,就像用精密的 “探测器”,精准地找出石斛里的各种成分。然后,利用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS - DA)等数据分析方法,来寻找野生和人工栽培细茎石斛代谢物的差异。最后,借助网络药理学分析,探索这些差异代谢物在药理活性方面的不同,从而了解野生和人工栽培细茎石斛在药用价值上的区别。
下面我们来详细看看研究结果。
细茎石斛代谢组的测定
研究人员为了减少样本差异,从野生森林和温室里采集了不同生长阶段的细茎石斛茎。接着,他们把样本用液氮研磨,再用预冷的 80% 甲醇和 0.1% 甲酸溶液处理,经过一系列操作后,将得到的上清液注入 UPLC - MS/MS 系统进行分析。这一分析可不得了,总共鉴定出了 840 种代谢物!这些代谢物被分成了 16 大类,像黄酮类、酚类、脂质、氨基酸及其衍生物等。其中,脂质、黄酮类和碳水化合物及其结合物这三类代谢物的数量最多,是细茎石斛里的 “主力军”。
野生和人工栽培细茎石斛代谢物的差异分析
研究人员用主成分分析(PCA)来评估植物来源对细茎石斛代谢物的影响。结果发现,PC1 和 PC2 这两个主成分分别能解释 25.23% 和 20.44% 的变异。野生和人工栽培细茎石斛的样本在 PC2 方向上明显分开,不过在 PC1 方向上有部分重叠。这说明虽然它们有差异,但也有一些相似之处,而且实验的重复性很好,结果可靠。
为了进一步找出差异显著的变量,研究人员又进行了偏最小二乘法判别分析(PLS - DA)。结果显示,模型的 R2 和 Q2 值分别为 0.91 和 - 0.80,表明这个模型的拟合度和预测性都很高。
差异代谢物的筛选和富集分析
研究人员设定了严格的筛选标准,用投影变量重要性(VIP≥1)结合倍数变化(|log?(FC)|≥1)来筛选代表性变量代谢物。结果发现,野生和人工栽培细茎石斛之间有 231 种代谢物存在显著差异。在人工栽培的细茎石斛中,有 86 种代谢物含量增加,145 种含量减少。
对这些差异代谢物进行注释和比较后发现,它们主要集中在黄酮类、脂质、酚类、生物碱及其衍生物、氨基酸及其衍生物、核苷酸及其衍生物等类别。把这些差异代谢物导入 MetaboAnalyst 5.0 进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢途径富集分析后,发现氨基酸生物合成或代谢、脂质代谢、碳氮代谢以及苯丙烷生物合成等途径被显著富集。
细茎石斛差异代谢物的生物学功能分析
研究人员通过对差异代谢物的表达水平进行层次聚类分析,发现人工栽培的细茎石斛和野生的相比,很多氨基酸和脂质的含量都有明显变化。17 种氨基酸及其衍生物含量下降,只有 L - 丝氨酸、L - 半胱氨酸和苏氨酸例外。23 种脂质里,有 11 种含量降低,主要是甘油磷脂和甘油酯。相反,一些黄酮类和酚类物质在人工栽培的细茎石斛中大量积累。
研究人员还发现,人工栽培的细茎石斛中总黄酮含量比野生的高,而且除了黄烷酮,大多数黄酮类物质的含量都更高。其中,山奈酚和槲皮素这两种黄酮醇在人工栽培的细茎石斛中显著积累,而山奈酚的前体物质含量在野生细茎石斛中更低,这显示出两者在代谢通量上的差异。
在植物激素方面,和野生细茎石斛相比,人工栽培的脱落酸(ABA)和水杨酸 O - 葡萄糖苷(SA - O - glucoside)含量显著升高,玉米素及其衍生物、1 - 氨基环丙烷羧酸(ACC)含量显著降低。而且,通过差异代谢物相关性分析发现,ABA 与 7 种生物碱、4 种萜类化合物、5 种黄酮类和 9 种酚类物质显著相关;SA 与 6 种代谢物密切相关;ACC 和玉米素与 6 种代谢物紧密相关,这表明植物激素和其他差异代谢物之间存在关联。
野生和人工栽培细茎石斛差异代谢物的网络药理学分析
研究人员用网络药理学方法,对差异代谢物进行深入分析。他们筛选出 78 种具有潜在药物特性的差异代谢物,匹配到 863 个基因靶点。构建化合物 - 靶点网络后发现,这个网络包含 938 个节点和 2840 条边,说明细茎石斛的生理活性是由众多活性成分和靶点共同作用产生的。
通过进一步分析,研究人员从上调和下调的代谢物靶点中分别选出 39 个和 36 个关键基因。KEGG 富集分析表明,人工栽培细茎石斛中增加的差异代谢物与肾素 - 血管紧张素系统、赖氨酸降解以及甲状腺和前列腺癌相关;减少的差异代谢物与氨基酸代谢、淀粉和蔗糖代谢等聚糖降解过程有关。疾病富集分析显示,增加的差异代谢物主要与呼吸系统疾病和心血管疾病相关,减少的差异代谢物主要与神经系统疾病相关,这说明野生和人工栽培细茎石斛在生理活性上有很大不同。
综合这些研究结果,研究人员得出结论:野生和人工栽培细茎石斛在黄酮类、氨基酸和脂质等代谢物的丰度上有很大差异,而且这些代谢物和多种植物激素的动态变化密切相关,这突出了植物激素在天然化合物代谢中的重要作用。同时,研究也揭示了野生和人工栽培细茎石斛不同的生理功能。
在讨论部分,研究人员提到,石斛是传统中药和滋补食品的重要来源,但市场上人工栽培的石斛质量参差不齐。分析不同石斛的代谢组,对全面评估其质量至关重要。生长环境对植物代谢物的组成和含量影响很大,在本研究中,野生森林和温室的环境差异明显影响了细茎石斛的生长和代谢。虽然在温室中没有检测到多糖积累的显著变化,但光照等因素对多糖积累可能很重要。
有趣的是,植物激素在调节次生代谢物生物合成中起着关键作用。在细茎石斛中,ABA 和 SA 可能促进特定黄酮类物质的积累,同时影响脂质代谢物的含量。这意味着可以通过施加 ABA 或 SA 来促进栽培石斛中重要代谢物的产生。此外,研究还发现野生和人工栽培细茎石斛在药理活性上的差异,在临床治疗中,选择不同来源的石斛可能会对治疗效果产生影响。
总的来说,这项研究为我们了解野生和人工栽培细茎石斛的代谢物变化提供了新的视角,对建立石斛的质量控制标准、指导原料资源的高效开发利用具有重要意义,也为石斛产业的健康发展指明了方向。