在全球范围内，胃癌（Gastric Cancer，GC）如同一个可怕的 “健康杀手”，它的发病率和死亡率都不容小觑，在全球恶性肿瘤中分别位居第五位 ，严重威胁着人们的生命健康。而 TP53 基因突变，在胃癌的发生发展过程中扮演着极为关键的角色。大约 50% 的胃癌患者都存在 TP53 基因突变，这些患者往往对传统化疗不敏感，治疗效果大打折扣，这也使得寻找针对 TP53 突变胃癌的有效治疗方法成为当务之急。

在 TP53 众多的突变类型里，移码突变（Frameshift mutation）是第二常见的类型。可别小看这个移码突变，它就像一个捣乱分子，突变位点不同，产生的 p53 突变蛋白也不一样，作用机制十分复杂。要是移码突变发生在 p53 的核定位信号（Nuclear Localization Sequence，NLS）之前，产生的 p53 突变蛋白就没办法进入细胞核发挥转录因子的作用，这类胃癌被称为 TP53 Frameshift NLS 胃癌。目前，人们对 TP53 Frameshift NLS 胃癌维持恶性增殖的机制还知之甚少，也没有找到有效的治疗方法，这就像在黑暗中摸索，找不到前进的方向。

江南大学附属医院的研究人员为了攻克这些难题，在《Clinical Epigenetics》期刊上发表了一篇名为 “LSD1 is a targetable vulnerability in gastric cancer harboring TP53 frameshift mutations” 的论文。他们经过一系列深入研究，发现了一种名为 GSK690 的药物，它就像一把精准的 “手术刀”，能够特异性地抑制 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞的生长。这一发现为 TP53 Frameshift NLS 胃癌患者带来了新的希望，为精准治疗指明了方向。

为了开展这项研究，研究人员运用了多种技术方法。他们通过细胞实验，用不同的组蛋白去甲基化酶抑制剂处理胃癌细胞系，观察细胞的生长情况；采用免疫印迹分析（Immunoblotting assay）检测相关蛋白的表达水平；利用细胞增殖和集落形成实验来评估细胞的增殖能力；借助定量逆转录聚合酶链反应（Quantitative reverse transcription PCR，qRT-PCR）测定基因表达水平；运用细胞周期分析和 EdU 实验（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine assay）探究细胞周期的变化；还建立了裸鼠异种移植模型进行体内实验，观察药物对肿瘤生长的影响；并且使用染色质免疫沉淀定量 PCR（Chromatin immunoprecipitation quantitative PCR，ChIP-qPCR）和双荧光素酶报告基因检测（Dual-luciferase reporter assays）等技术来深入研究相关机制。

下面我们来详细看看研究人员都有哪些重要发现。

研究人员分析了 TCGA 胃癌数据集，发现 TP53 是胃癌中最常发生突变的基因之一，尤其是在亚洲胃癌人群中更为普遍。在各种 TP53 突变类型里，移码突变的发生率仅次于热点突变。进一步研究发现，TP53 Frameshift NLS 胃癌在携带 TP53 移码突变的胃癌患者中占比高达 89%，大约 17.3% 的胃癌患者存在因 TP53 移码突变导致的核转位缺陷。而且，这些患者的预后明显比其他胃癌患者更差。这就像是给了研究人员一个重要线索，让他们更加坚定地去寻找针对这种亚型胃癌的治疗方法。

研究人员在六种不同 TP53 突变类型或野生型的癌细胞系中检测了 p53 蛋白的表达水平，发现 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞中 p53 蛋白的表达水平明显低于其他类型。由于除了 HGC-27 细胞系外难以获得更多 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞系，他们选择了食管腺癌细胞系 SK-GT4 来验证相关结果。接着，他们用组蛋白去甲基化酶抑制剂库处理不同突变类型的胃癌细胞，结果发现 GSK690，一种赖氨酸特异性去甲基化酶 1（Lysine-specific demethylase 1，LSD1）的可逆抑制剂，能够有效地抑制 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞系 HGC-27 的增殖活性，而对野生型 TP53 的胃癌细胞（AGS）和点突变 TP53 的胃癌细胞（NCI-N87）的增殖抑制作用却很弱。分子对接分析还证实了 LSD1 和 GSK690 之间的关联。此外，另一种 LSD1 抑制剂 GSK2879552 对 TP53 Frameshift NLS 癌细胞也表现出高选择性抑制活性。这些结果表明，LSD1 抑制剂，尤其是 GSK690，有可能成为治疗 TP53 Frameshift NLS 胃癌的特异性药物。

为了进一步验证 GSK690 对 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞的特异性抑制作用，研究人员用不同浓度的 GSK690 处理不同 TP53 突变类型的胃癌细胞。CCK-8 实验和集落形成实验结果显示，GSK690 对 TP53 Frameshift NLS 癌细胞（HGC-27 和 SK-GT-4）的抑制作用呈剂量依赖性，而对野生型和点突变 TP53 的胃癌细胞抑制作用较弱。EdU 细胞增殖实验也进一步验证了 GSK690 对 TP53 Frameshift NLS 癌细胞的高效抑制作用。这就像是找到了一把专门对付 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞的 “利剑”，在体外实验中展现出了强大的威力。

研究人员构建了 HGC-27 细胞的裸鼠异种移植模型，通过腹腔注射不同浓度的 GSK690（0、5 和 10mg/kg）进行实验。结果发现，GSK690 在体内同样能显著抑制 TP53 Frameshift NLS 肿瘤的生长，而且随着 GSK690 浓度的增加，肿瘤增殖标志物 Ki-67 的表达水平相应降低。在实验过程中，裸鼠的体重没有明显变化，对心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏等器官进行组织学检查也未发现明显的组织学变化，这说明 GSK690 在体内没有明显的毒性。这无疑是一个令人振奋的消息，表明 GSK690 在体内也能有效地抑制 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞的恶性增殖。

作为 LSD1 的特异性可逆抑制剂，GSK690 对 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞具有显著的增殖抑制作用，这暗示着 LSD1 在维持这种胃癌亚型的恶性增殖中可能起着关键作用。研究人员对 TCGA 胃癌队列中的 TP53 Frameshift NLS 胃癌患者进行分析，发现 LSD1 高表达组和低表达组的差异表达基因主要富集在 “细胞周期” 通路。通过流式细胞术分析发现，GSK690 能够剂量依赖性地诱导 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞发生 G1-S 期阻滞，敲低 KDM1A（LSD1 的编码基因）也能得到类似的结果。进一步研究发现，CCNA2 是细胞周期的关键调节因子，在 KDM1A 高表达组中显著上调。实验表明，GSK690 或敲低 KDM1A 能够抑制 HGC27 细胞中 CCNA2 的表达，但对 AGS 和 NCI-N87 细胞中的 CCNA2 表达没有影响。在 HGC-27 异种移植瘤中，Western blotting 和 IHC 结果也证实了 GSK690 能够抑制 CCNA2 的表达。ChIP 分析还发现，GSK690 能够诱导 HGC27 细胞中 CCNA2 启动子区域的 H3K9me2 富集。这些结果表明，CCNA2 是 LSD1 在调节 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞周期进程中的关键下游靶点。

研究人员发现，TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞中 LSD1 的表达明显高于其他胃癌细胞，敲低 KDM1A 能够显著抑制 TP53 Frameshift NLS 癌细胞的恶性增殖。他们推测，TP53 Frameshift NLS 癌细胞中 p53 核分布缺陷导致 p53 介导的转录抑制作用丧失，从而使得 KDM1A/LSD1 表达增加。实验结果也证实了这一点，敲低 p53 能够上调 TP53 野生型 AGS 细胞中 LSD1 和 CCNA2 的表达，而过表达 p53 则会使 HGC-27 细胞中 LSD1 和 CCNA2 的表达下调。通过双荧光素酶和 ChIP-qPCR 实验还发现，p53 能够结合到 KDM1A 启动子区域并抑制其转录。这一系列研究揭示了 p53 与 LSD1 之间的调控关系，为理解 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞的恶性增殖机制提供了重要依据。

综合来看，这项研究定义了一种新的胃癌亚型 ——TP53 Frameshift NLS 胃癌，并发现 GSK690 是治疗这种亚型胃癌的潜在策略。GSK690 通过抑制 LSD1-CCNA2 轴，诱导细胞周期阻滞，从而抑制癌细胞的增殖。研究还揭示了 p53 转录抑制 KDM1A 表达的机制，解释了为什么 TP53 Frameshift NLS 胃癌细胞对 GSK690 特别敏感。虽然目前的研究还存在一些局限性，比如主要集中在胃癌和食管腺癌，还需要进一步研究结论是否适用于其他类型的癌症，而且由于常规抗体无法检测 TP53 移码突变产生的 p53 突变蛋白，限制了对这种亚型的进一步研究。但不可否认的是，这项研究为胃癌的精准治疗开辟了新的道路，为后续开发针对 TP53 Frameshift NLS 胃癌的靶向治疗药物提供了重要的理论基础和实验依据，有望在未来为众多胃癌患者带来新的生机和希望。