CryoVIA:冷冻电镜下定量解析膜结构的创新工具,开启生物膜研究新征程

《Structure》:CryoVIA: An image analysis toolkit for the quantification of membrane structures from cryo-EM micrographs

【字体: 时间:2025年02月19日 来源:Structure 4.4

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  在冷冻电镜(cryo - EM)研究中,膜结构定量分析耗时且缺乏有效工具。研究人员开展 “CryoVIA: An image analysis toolkit for the quantification of membrane structures from cryo - EM micrographs” 主题研究,开发 CryoVIA 软件,能高效分析膜结构,为研究蛋白 - 膜相互作用等提供新途径。

  在生命科学的微观研究领域,冷冻电镜(cryo - EM)是探索蛋白质与膜相互作用的有力武器,它能在接近天然的条件下,为我们呈现生物膜和大分子的高分辨率图像。然而,目前对膜结构的定量分析却困难重重。一方面,当涉及大量数据时,人工分析不仅耗时费力,而且主观性强;另一方面,现有的图像处理工具难以满足需求,从众多显微照片中对膜结构进行定量分析,仍是一项主要依靠人工完成的艰巨任务。为了打破这一困境,来自德国 Forschungszentrum Jülich 的 Ernst - Ruska Centre for Microscopy and Spectroscopy with Electrons 和 Heinrich Heine University 的研究人员 Philipp Scho¨nnenbeck、Benedikt Junglas 和 Carsten Sachse 开展了一项重要研究,相关成果发表在《Structure》杂志上。
研究人员开发了一款名为冷冻囊泡图像分析仪(CryoVIA)的自动化图像处理软件,旨在实现对冷冻电镜图像中脂质结构的大规模数据分析。为了实现这一目标,研究人员采用了多种关键技术方法。在图像分割方面,运用预训练的 U - net 神经网络,对给定的显微照片进行处理,定位感兴趣的膜结构;对于膜结构识别,通过将分割结果拆分为独立的连通组件来确定膜实体,对于重叠的膜结构则采用特殊算法进行分离;在结构分析阶段,计算每个膜轮廓的局部和全局结构参数,如曲率、双层厚度等,并利用卷积神经网络对膜形状进行分类。

下面来看看具体的研究结果:

  1. CryoVIA 的主要工作流程:CryoVIA 的工作流程主要分为三个部分。首先是基于神经网络的分割,通过预训练的 U - net 对显微照片进行分割,标记出膜结构。接着是膜结构识别,将分割结果转化为独立的膜实体,对于重叠的膜结构,通过监测局部膜结构的连续性进行分离和重新连接。最后是结构分析,对识别出的膜结构进行详细的定量分析,提取局部和全局结构参数,并进行形状分类。
  2. 膜特征的识别:在膜结构识别过程中,通过一系列操作,成功将最初分割的骨架分离为单个膜结构,并对膜轮廓进行细化,得到精确的膜轮廓,为后续分析做好准备。
  3. 局部和全局膜特征的定量提取:在这一环节,研究人员对每个膜轮廓进行结构分析。通过计算曲率来描述膜轮廓的局部形状变化,定义曲率为最佳拟合圆半径的倒数,根据曲率的正负判断膜的凹凸区域。对于双层厚度的估计,通过提取和平滑双层密度的局部横截面来确定。此外,还直接从膜轮廓提取直径、周长、面积等全局结构参数,并利用卷积神经网络对膜形状进行分类,默认分类器对七种形状的识别准确率高达 98.6%。
  4. 曲率和双层厚度估计的误差:为了评估估计的准确性,研究人员进行了误差分析。在曲率估计方面,通过比较局部测量值与基于分割的全局参数,发现较大的邻域尺寸(200 - 500 ?)能获得较小的误差,最终选择 200 ? 作为默认邻域大小。在双层厚度估计方面,通过检查估计值的前向差异,得出 DOPC 囊泡双层厚度的估计误差约为 0.2 ?。
  5. 多个脂质体测试数据集的分析:研究人员对多个不同脂质组成的数据集进行分析,发现不同制备方法和膜组成会导致膜结构的差异。例如,超声处理的 DOPC 囊泡的周长、直径和面积等参数与其他样本不同;DOPG/DPPG 囊泡的双层厚度变化较大,且与直径存在一定相关性。此外,通过形状分类发现,不同样本的膜形状分布也有所不同。
  6. 细菌 ESCRT - III 成员 PspA 的膜重塑效应:研究人员应用 CryoVIA 分析与细菌 ESCRT - III 蛋白 PspA 孵育的脂质体数据集,发现 PspA 能使小单层囊泡(SUVs)转变为更大的囊泡,且大囊泡的双层厚度增加。

在研究结论与讨论部分,CryoVIA 软件的优势显著。它涵盖了从神经网络分割到结构分析的完整工作流程,能够高精度地分析膜的多种结构参数,并对膜形状进行分类。通过对不同脂质体数据集和蛋白 - 脂质混合物的分析,验证了其有效性。此外,CryoVIA 对膜厚度的估计精确,与先前报道的值相符。该软件不仅为研究膜重塑蛋白提供了新的手段,还可用于辅助解决膜蛋白结构问题,在生物膜研究领域具有重要意义,为进一步探索蛋白质与脂质的相互作用开辟了新的道路。

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