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研究人员针对结肠癌治疗难题，研究 hBD-1 对其自噬的调控，发现相关作用机制，为治疗提供新靶点。
在癌症的世界里，结肠癌（Colorectal cancer，CRC）是一个不容忽视的 “狠角色”。它在全球癌症发病率中排名第三，死亡率更是位居第二 ，如同隐藏在暗处的杀手，悄无声息地威胁着人们的生命健康。由于早期症状不明显，缺乏有效的早期诊断标志物，许多患者确诊时已处于晚期，治疗手段有限，且现有治疗方法如手术、放疗和化疗不仅副作用大，对正常细胞有很强的毒性，还容易出现复发和转移的情况，因此，寻找更有效的治疗方法迫在眉睫。
在这样的背景下，内蒙古医科大学的研究人员展开了一项意义重大的研究。他们聚焦于人类 β- 防御素 1（Human beta-defensin-1，hBD-1）、环状核糖核酸（Circular ribonucleic acids，circRNAs）和微小 RNA（microRNA，miRNA）在结肠癌中的作用机制，致力于为结肠癌的治疗开辟新的道路。该研究成果发表在《Journal of Translational Medicine》杂志上。
研究人员在此次研究中运用了多种关键技术方法。在细胞实验方面，通过细胞计数试剂盒 - 8（Cell Counting Kit-8，CCK-8）检测细胞增殖能力，划痕实验评估细胞迁移能力；采用单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverine，MDC）染色观察细胞内自噬小泡；运用蛋白质免疫印迹法（Western blot analysis）分析相关信号通路蛋白水平。在基因研究技术上，利用 RNA 提取和定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测基因表达水平；通过 circRNA 测序和生物信息学分析筛选差异表达的 circRNAs；借助核糖核酸酶 R（RNase R）消化实验验证 circRNA 的环状结构；运用放射免疫沉淀实验（radioimmunoprecipitation assay）验证分子间的相互作用。
研究结果主要围绕以下几个方面展开：
- hBD-1 抑制结肠癌细胞增殖并诱导自噬：CCK-8 实验表明，hBD-1 能降低结肠癌细胞的存活率，抑制细胞增殖，且浓度为 50ng/mL 时效果显著。划痕实验显示，hBD-1 可减少细胞迁移。MDC 染色发现，hBD-1 增加了细胞内自噬小泡的数量。Western blot 分析进一步证实，hBD-1 抑制了 AKT/mTOR 信号通路，增强了细胞自噬，促进了自噬相关蛋白 Beclin-1 和 LC3II/I 的表达。
- hBD-1 下调结肠癌细胞中 HAS-CIRCpedia-5280 的表达：对 SW-620 细胞进行 RNA 测序，发现 hBD-1 处理后，细胞中 circRNAs 的表达发生变化，其中 HAS-CIRCpedia-5280 的表达下调。通过 RNase R 消化实验和聚合酶链式反应（PCR）验证了 HAS-CIRCpedia-5280 的环状结构，表明它在结肠癌细胞中可形成稳定的环状结构。
- HAS-CIRCpedia-5280 作为 miR-4712-5p 的海绵发挥作用：研究人员通过数据库预测和实验验证，发现 HAS-CIRCpedia-5280 与 miR-4712-5p 可直接结合 Ago2，表明 HAS-CIRCpedia-5280 可能作为 miR-4712-5p 的海绵，影响其功能。
- HAS-CIRCpedia-5280 通过 hBD-1 抑制结肠癌细胞增殖、迁移并促进自噬：过表达 HAS-CIRCpedia-5280 可促进细胞增殖和迁移，抑制自噬；但在 hBD-1 存在的情况下，这些现象发生逆转，表明 HAS-CIRCpedia-5280 在 hBD-1 的作用下对结肠癌细胞的增殖、迁移和自噬有重要影响。
- miR-4712-5p 通过 hBD-1 抑制结肠癌细胞进展：抑制 miR-4712-5p 的表达，可增强结肠癌细胞的增殖和迁移能力，减少自噬小泡数量，抑制自噬；而 hBD-1 能逆转这些作用，进一步证明了 miR-4712-5p 在结肠癌细胞进展中的重要作用以及 hBD-1 对其的调控作用。
- miR-4712-5p 模拟物减轻过表达 HAS-CIRCpedia-5280 在结肠癌细胞中的作用：共转染 miR-4712-5p 模拟物和 HAS-CIRCpedia-5280 表达质粒，可抑制结肠癌细胞的增殖和迁移，促进自噬，hBD-1 的存在进一步增强了这些效果，表明 HAS-CIRCpedia-5280 通过海绵吸附 miR-4712-5p，在 hBD-1 的参与下，对结肠癌细胞的生长和转移产生重要影响 。
综合研究结论与讨论部分，该研究揭示了 hBD-1 抑制结肠癌细胞增殖并促进细胞自噬的机制，即 hBD-1 通过 HAS-CIRCpedia-5280/miR-4712-5p 抑制 AKT/mTOR 磷酸化，进而诱导自噬。这一发现意义重大，HAS-CIRCpedia-5280/miR-4712-5p 有望成为结肠癌诊断和预后的生物标志物，为结肠癌的治疗提供了新的潜在靶点和理论依据，为攻克结肠癌这一难题带来了新的希望。
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