《BMC Veterinary Research》：Development of a monoclonal antibody-based competitive enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies against duck adenovirus 3
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鸭腺病毒 3 型（DAdV-3）给鸭场带来严重经济损失，且无商业疫苗。研究人员开展了基于单克隆抗体（mAb）的竞争酶联免疫吸附试验（c-ELISA）检测 DAdV-3 抗体的研究。结果显示该方法特异性、重复性良好，有望用于临床诊断和疫苗评估。
鸭腺病毒 3 型（DAdV-3）是一种会让鸭的肝脏和肾脏出现肿胀、出血症状的新型病毒，给中国番鸭养殖业带来了沉重打击。近年来，它持续肆虐，由于目前没有有效的商业疫苗，早期精准诊断就成了控制疫情的关键。为了应对这一难题，扬州大学的研究人员开展了一项研究，致力于开发一种能够检测鸭腺病毒 3 型抗体的新方法。
研究人员运用了多种技术方法。在样本方面，使用了来自感染和未感染 DAdV-3 的番鸭血清，还有其他多种病毒的阳性血清。关键技术上，制备了针对 DAdV-3 的 Fiber-2 蛋白的单克隆抗体（mAb）3D9，并将其标记辣根过氧化物酶（HRP）；通过棋盘滴定法确定了 Fiber-2 蛋白和 mAb 3D9-HRP 的最佳浓度与稀释度；利用间接免疫荧光试验（IFA）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）对血清进行验证 。
研究结果如下：
单克隆抗体 3D9 的制备与特性 ：成功制备了 mAb 3D9，它只与感染 DAdV-3 的细胞发生反应，对其他腺病毒无反应，且经纯化和 HRP 标记后，浓度适宜。c-ELISA 反应条件优化 ：确定了 c-ELISA 的最佳反应条件，Fiber-2 蛋白最佳浓度为 1.25μg/mL，mAb 3D9-HRP 最佳稀释度为 1:16000，最佳血清稀释度为 1:4，最合适的封闭液是 5% 脱脂牛奶，血清和底物的最佳反应时间分别为 60 分钟和 10 分钟。c-ELISA 临界值确定 ：用 48 份临床阴性鸭血清确定了 c-ELISA 的临界值为 18%，高于此值判定为阳性，反之为阴性。c-ELISA 性能评估 ：用 24 份鸭血清进行初步一致性评估，c-ELISA 检测结果与 IFA 一致；交叉反应性评估显示，该方法与其他病毒阳性血清无交叉反应；重复性测试中，批内和批间变异系数均低于 10%；与间接 ELISA 比较，两种方法符合率达 90.98%，Kappa 值为 0.815，一致性极高。
研究结论表明，开发的基于 mAb 的 c-ELISA 检测 DAdV-3 抗体的方法，特异性强、重复性好，与 IFA 结果高度一致，且与其他阳性血清无交叉反应，能有效检测早期感染血清。虽然样本规模有待扩大，但该方法有望成为鸭群中大规模监测 DAdV-3 的血清学诊断工具，还可用于评估疫苗免疫后的抗体水平。
这项研究意义重大，为鸭腺病毒 3 型感染的防控提供了有力的技术支持。它有助于及时发现感染鸭群，阻止病毒传播，减少经济损失；也为未来疫苗研发和评估提供了有效的检测手段，推动了鸭腺病毒 3 型相关疾病防控领域的发展 。
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